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本试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统，适合于从真菌组织细胞中快速简单地提取基因组DNA。可在30分钟内完成一个或多个100mg新鲜或20mg干燥的真菌样品DNA的纯化工作。提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀，并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质，纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。

新鲜或干燥的真菌组织(细胞)磨碎后经裂解液裂解；蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除；然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤，进一步将多糖，多酚和细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

• 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。
  
• 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
  
• 快速，简捷，单个样品操作一般可在1小时内完成。
  
• 高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应。

• RNase A保存在即用型甘油缓冲液中，常温运输，收到后，不超过25℃室温至少保存6个月，4℃保存12个月，长期保存放-20℃。
  
• 缓冲液AP1、AP3/E低温时可能出现析出和沉淀，可以在65℃水浴几分钟帮助重新溶解(AP3加入乙醇前可加热，加入乙醇后不可加热)，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
  
• 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

• 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机。
  
• 开始实验前将需要的水浴先预热到65℃备用。
  
• 缓冲液AP3/E中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
  
• 不同来源的真菌组织细胞材料提取DNA的量会有差异，一般100mg新鲜组织典型产量可达3～25μg。
  
• 洗脱液EB不含螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可使用水洗脱，但应该确保pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应保存在-20℃。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH8.0)，但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。
  
• 真菌种类复杂，没有一种试剂盒可以提取所有种类的真菌DNA。如果有的真菌多糖多酚含量过于丰富、次级代谢产物太复杂导致本试剂盒效果不佳，可以选择植物基因组DNA快速提取试剂盒(货号：ALH144)提取真菌，一般该试剂盒对于多糖多酚次级代谢产物复杂的真菌DNA提取效果良好。

• 第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记，以免多次加入!
  
• 第一次使用前请先在缓冲液AP3/E中加入指定量无水乙醇，充分混匀!

• 取适量真菌组织(新鲜组织100mg或干重组织20mg，可适当多取一些样品弥补粘在研钵上的损失)在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。
  
  • 研磨前，可准备一个1.5mL离心管，加入400μL缓冲液AP1和4μL RNase A(10mg/mL)室温备用。
  
  
• 转移细粉到前面准备好的1.5mL离心管(已加入400μL缓冲液AP1和4μL RNase A)，旋涡振荡，充分混匀帮助裂解。
  
• 65℃水浴10分钟，在水浴过程中颠倒离心管2～3次，混合样品。
  
  • 此步骤也可室温放置10分钟，但是65℃水浴10分钟产量更高。
  
  
• 加入130μL缓冲液AP2，涡旋振荡混匀1分钟，冰上放置5分钟，13000rpm离心5～10分钟，小心吸取上清到一个新的1.5mL离心管，注意不要吸到界面物质。
  
  • 此步骤可以沉淀去除蛋白、多糖等各种杂质。
  
  
• 计算上清量，加入1.5倍体积的AP3/E(请先检查是否已加入无水乙醇!)，立即振荡混匀。
  
  • 加入AP3/E可能会出现絮状沉淀，但不影响DNA提取。注意将AP3/E直接加入到上清并立即吹打或者振荡混匀。
• 将上一步所得混合物(包括可能出现的沉淀)加入一个吸附柱AC中，(吸附柱放入收集管中)13000rpm离心30～60秒，倒掉收集管中的废液(先加650μL离心，弃废液，再加入剩余的溶液，再次离心)。
  
• 加入600μL漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!)，13000rpm离心30秒，弃掉废液。
  
• 重复一遍操作步骤7。
  
  • 如果吸附柱膜还呈现较多绿色色素，可添加此步漂洗，向吸附柱AC中加入500μL无水乙醇，13000rpm离心30秒，弃掉废液。
  
  
• 将吸附柱AC放回空收集管中，13000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
  
• 取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加50～100μL洗脱缓冲液EB，室温放置3～5分钟，13000rpm离心1分钟。将得到的溶液重新加入吸附柱中，室温放置2分钟，13000rpm离心1分钟。
  
  • 洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果预计和需要产量高，可增大洗脱体积，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积不应少于50μL，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。
• DNA可以短期存放在2～8℃，如果要长时间存放，可以放置在-20℃。